Klonig Gen-Gen Pengkode Enzim Termostabil dengan PCR Acak

Abstract

Pada penelitian ini telah dilakukan kloning gen pengkode enzim termostabil dari sampel alam Kawah Domas dengan polymerase chain reaction (PCR) acak melalui pendekatan metagenom. Tujuan penelitian ini untuk memperoleh dan mempelajari gen fungsional pengkode enzim termostabil dari sampel metagenom Kawah Domas, memperoleh urutan nukleotida gen pengkode enzim termostabil dari sampel metagenom Kawah Domas, serta mendapat informasi homologi dengan pendekatan bioinformatik. Metode yang digunakan yaitu dengan mengamplifikasi sampel metagenom Kawah Domas dengan proses PCR acak, amplikon disisipkan dalam plasmid dan ditransformasi dalam Escherichia coli (E. coli), selanjutnya urutan nukleotida pada fragmen DNA, ditentukan dan dianalisis untuk menentukan homologi dengan menggunakan laman NCBI. Hasilnya diperoleh beberapa transforman yang memiliki plasmid rekombinan yang mempunyai sisipan DNA. Urutan nukleotida fragmen DNA telah diperoleh menunjukkan adanya lima sampel yang berbeda. Berdasarkan laman NCBI BLAST, lima sampel memiliki homologi dengan urutan nukleotida pengkode enzim reverse gyrase, subunit ABC transporter permease, dan protoporphyrin IX Magnesium-chelatase.