Kloning dan Karakterisasi Fragmen Klenow DNA Polimerase UPER1 (Pol UPER1)

Abstract

DNA Polimerase merupakan enzim yang berperan dalam proses replikasi DNA di dalam sel. Enzim tersebut memiliki peranan yang sangat penting dalam kehidupan makhluk hidup dan biasa disebut sebagai enzim kunci pada pelestarian makhluk hidup. Enzim DNA Polimerase juga memiliki peran penting dalam bidang bioteknologi, misalnya; dalam teknik PCR, pelabelan DNA, kloning, sekuensing, dan masih banyak peran lainnya. DNA Polimerase dalam bidang bioteknologi, umumnya merupakan DNA Polimerase termostabil yang memiliki aktivitas polimerase dan memiliki aktivitas proofreading yang baik. DNA Polimerase termostabil dapat diperoleh dengan cara mengisolasi enzim tersebut dari mikroba termofilik yang betahan hidup pada habitat dengan suhu tinggi di atas 50°C. Pada penelitian ini telah diklon dan dikarakterisasi fragmen klenow DNA Polimerase UPER1 (Pol UPER1). Fragmen klenow ini diperoleh dari DNA Polimerase utuh kelompok archaea sekitar 2700 pb (2,7 kb) yang dihilangkan daerah eksonuklease 5’-3’. Amplifikasi fragmen klenow dilakukan dengan menggunakan template DNA Polimerase utuh yang berukuran sekitar 2700 pb (2,7 kb) dengan menggunakan beberapa primer diantaranya; primer DPBF, primer DPBR, primer penghilang stop kodon (K8), dan Mega primer 1 kb. Kloning yang dilakukan pada vektor pJET 1.2/blunt. Karakterisasi komputasi yang menggunakan situs NCBI mode BLASTX dilakukan untuk memperoleh fragmen klenow DNA Polimerase dengan ukuran sekitar 2 kb tanpa adanya stop kodon di tengah pada urutan DNAnya.